黑曲霉木聚糖酶基因(xynB)的克隆及真核分泌表达

• 作者: 刘德武 吴珍芳 周庆丰 周美华 孟繁明 张茂 杜云平
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑曲霉 木聚糖酶 分泌表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 368-373
• 分类号: Q5
• 字数: 4712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.02.027

摘要

通过RT-PCR方法,以黑曲霉(Aspergillus niger)GIM3.452总RNA为模板,克隆出木聚糖酶B(xy-lanase B,xynB)基因的成熟肽编码序列(567 bp),编码188个氨基酸.将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretoryprotein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段PSxynB,并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSxynB,重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且构建正确.在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-PSxynB转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测到了木聚糖酶活最高达36.4 IU/mL.