介导大鼠Ppif基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定

• 作者: 叶章群 夏丁 夏宗禹 朱珉 胡威 陈刚 陈志强 马杰锋
• 来源期刊: 临床泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Ppif基因 慢病毒载体 转移质粒
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 701-703,707
• 分类号: Q343.1|R394
• 字数: 2589字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1420.2010.09.024

摘要

目的:构建介导大鼠Ppif基因沉默的慢病毒载体转移质粒pGCL-Ppif,为进一步包装慢病毒载体奠定基础.方法:以大鼠Ppif基因为靶基因,根据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,设计4对有小发夹结构的RNAi靶点序列,退火形成双链DNA,双酶切后定向克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-Ppif中,构建4个含靶基因片段的重组慢病毒载体转移质粒pGCL-Ppif,并对质粒进行PCR及测序鉴定.结果:Ppif的短发夹RNA(shR-NA)片段被成功克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-GFP中,4对插入序列与设计的靶基因片段完全一致.结论:构建了能够表达4个含Ppif靶基因片段的慢病毒载体转移质粒,为进一步包装介导Ppif基因沉默的慢病毒载体奠定了基础.