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摘要:
目的:构建人铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因真核表达载体,并在HeLa细胞中进行表达.方法:应用RT-PCR从人外周血中扩增SOD1基因开放阅读框(ORF),采用TA克隆技术,将目的片段插入到pUCm-T载体中进行鉴定,重组的质粒命名为pUCm-T-SOD1.随后,将SOD1进一步克隆到真核表达载体pTracer-CMV/Bsd中.用脂质体将经过测序、验证的重组pTracer-CMV/Basd-SOD1质粒转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,转染HeLa细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选4周,用RT-PCR、Western blot检测SOD1的表达.结果:成功构建了pTracer-CMV/Bsd-SOD1真核表达质粒,转染HeLa细胞,发现转染成功的细胞均发绿色荧光;RT-PCR及Western blot检测结果表明,所转染的SOD1在HeLa细胞中成功表达.结论:成功构建了能够同时表达绿色荧光蛋白和SOD1的真核表达质粒pTracer-CMV/Bsd-SOD1,为进一步研究SOD1在基因治疗中的作用奠定了基础.
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文献信息
篇名 SOD1真核表达载体的构建及表达
来源期刊 细胞与分子免疫学杂志 学科 医学
关键词 铜锌超氧化物歧化酶 载体构建 基因转染 基因表达 基因治疗
年,卷(期) 2010,(10) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 962-965
页数 分类号 R392.9
字数 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 邢晓为 中南大学湘雅三医院医学实验中心 60 303 8.0 13.0
2 孙虹 中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉头颈外科 123 871 14.0 19.0
3 黄利华 中南大学湘雅三医院医学实验中心 39 99 5.0 8.0
4 吴雄辉 中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉头颈外科 3 20 2.0 3.0
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研究主题发展历程
节点文献
铜锌超氧化物歧化酶
载体构建
基因转染
基因表达
基因治疗
研究起点
研究来源
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
细胞与分子免疫学杂志
月刊
1007-8738
61-1304/R
大16开
西安市长乐西路169号
52-184
1985
chi
出版文献量(篇)
7013
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22
总被引数(次)
39763
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