稳定转染pEGFP-4.1 N乳癌细胞系的筛选与鉴定

• 作者: 任岩 宋安营 康巧珍 时晓芳 汲振余 祁元明 郭欢 闫红霞 高艳锋
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乳癌 4.1N 增强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 MDA-MB-231
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 551-554
• 分类号: R737.9
• 字数: 2660字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2010.04.007

摘要

目的:建立真核表达载体pEGFP-4.1N稳定转染的乳癌MDA-MB-231细胞系,观察4.1N在MDA-MB-231细胞中的表达和定位.方法:真核表达载体pEGFP-4.1N转化到大肠杆菌中进行扩增,酶切鉴定插入片段后进行测序.脂质体法将重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,经G418筛选抗性克隆,利用倒置荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的定位,并用Western blot检测融合蛋白的表达.结果:真核表达载体pEGFP-4.1N的酶切片段经琼脂糖电泳和测序鉴定结果正确.G418筛选14 d后获得pEGFP-4.1 N稳定转染的MDA-MB-231抗性克隆.荧光显微镜下观察到融合蛋白在MDA-MB-231阳性克隆的细胞质中表达.核内不表达.Western blot亦检测到4.1N融合蛋白的表达.结论:成功建立了pEGFP-4.1N稳定转染的乳痛细胞系MDA-MB-231阳性克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高艳锋	郑州大学生物工程系	30	76	6.0	7.0
2	祁元明	郑州大学生物工程系	49	132	7.0	9.0
3	闫红霞	郑州大学生物工程系	11	22	2.0	4.0
4	汲振余		13	33	3.0	5.0
5	康巧珍	郑州大学生物工程系	32	117	7.0	9.0
6	郭欢	郑州大学生物工程系	4	4	1.0	2.0
7	时晓芳	郑州大学生物工程系	2	8	1.0	2.0
8	宋安营	郑州大学生物工程系	1	1	1.0	1.0
9	任岩	郑州大学生物工程系	1	1	1.0	1.0