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中国流行的C基因型HBV稳定复制表达细胞系的建立
中国流行的C基因型HBV稳定复制表达细胞系的建立
作者:
刘妍
刘文
徐东平
思兰兰
王琳
纪冬
钟彦伟
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
肝炎病毒,乙型
基因型
病毒复制
细胞系
抗原
摘要:
目的 建立中国流行的C基因型HBV的稳定复制表达细胞系.方法 从1例慢性乙肝患者血清中分离克隆得到1株C基因型病毒DNA全序列,以此为模板扩增产生1.3倍体HBV DNA,包含完整基因组(3.2kb)、从1825位点(polyA)至2599位点大小为775bp的3′端冗余序列,以及至1400位点大小为425bp的5′端冗余序列,将其连接改建重组后的pcDNA3.1(+)载体,构建pN31-51-6-1表达质粒,转染肝癌细胞系HepG2.采用ELISA检测HBsAg、HBeAg的瞬时表达情况,选择双高表达细胞孔进一步行G418筛选稳定表达细胞系.通过ELISA、免疫组化、直接免疫荧光流式细胞术以及HBV复制中间体核心颗粒DNA、细胞内cccDNA、分泌上清中病毒DNA的RT-PCR检测等方法评估稳定细胞克隆的复制表达情况.结果 获得1株具有高抗原表达和高复制能力的细胞克隆HepG2-51-6-1,已稳定传代26代.检测HBsAg、HBeAg吸光度(A)值分别为>3.5和1.29;直接免疫荧光流式细胞术证实细胞表面存在s抗原,免疫组化染色可见细胞内病毒表达.分泌到培养上清中的HBV DNA和细胞内的HBV复制中间体水平分别为2.0×104和5.5×105拷贝/ml,HBV cccDNA为6~8拷贝/细胞.结论 成功获得HBV-1.3倍体转染的C基因型HBV稳定复制表达细胞系,为研究我国流行HBV的生物特性和抗HBV新药筛选奠定了基础.
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内容分析
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(/年)
文献信息
篇名
中国流行的C基因型HBV稳定复制表达细胞系的建立
来源期刊
解放军医学杂志
学科
医学
关键词
肝炎病毒,乙型
基因型
病毒复制
细胞系
抗原
年,卷(期)
2010,(12)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
1425-1428
页数
分类号
R512.62
字数
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
钟彦伟
解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室
18
141
7.0
11.0
2
刘妍
解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室
13
95
6.0
9.0
3
王琳
解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室
11
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4
纪冬
解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室
7
27
2.0
5.0
5
刘文
解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室
3
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1.0
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思兰兰
解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室
1
1
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传播情况
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参考文献
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2019(1)
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二级引证文献(1)
研究主题发展历程
节点文献
肝炎病毒,乙型
基因型
病毒复制
细胞系
抗原
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
解放军医学杂志
主办单位:
人民军医出版社
出版周期:
月刊
ISSN:
0577-7402
CN:
11-1056/R
开本:
大16开
出版地:
北京100036信箱188分箱
邮发代号:
2-74
创刊时间:
1964
语种:
chi
出版文献量(篇)
8116
总下载数(次)
11
总被引数(次)
57068
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