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摘要:
目的 建立中国流行的C基因型HBV的稳定复制表达细胞系.方法 从1例慢性乙肝患者血清中分离克隆得到1株C基因型病毒DNA全序列,以此为模板扩增产生1.3倍体HBV DNA,包含完整基因组(3.2kb)、从1825位点(polyA)至2599位点大小为775bp的3′端冗余序列,以及至1400位点大小为425bp的5′端冗余序列,将其连接改建重组后的pcDNA3.1(+)载体,构建pN31-51-6-1表达质粒,转染肝癌细胞系HepG2.采用ELISA检测HBsAg、HBeAg的瞬时表达情况,选择双高表达细胞孔进一步行G418筛选稳定表达细胞系.通过ELISA、免疫组化、直接免疫荧光流式细胞术以及HBV复制中间体核心颗粒DNA、细胞内cccDNA、分泌上清中病毒DNA的RT-PCR检测等方法评估稳定细胞克隆的复制表达情况.结果 获得1株具有高抗原表达和高复制能力的细胞克隆HepG2-51-6-1,已稳定传代26代.检测HBsAg、HBeAg吸光度(A)值分别为>3.5和1.29;直接免疫荧光流式细胞术证实细胞表面存在s抗原,免疫组化染色可见细胞内病毒表达.分泌到培养上清中的HBV DNA和细胞内的HBV复制中间体水平分别为2.0×104和5.5×105拷贝/ml,HBV cccDNA为6~8拷贝/细胞.结论 成功获得HBV-1.3倍体转染的C基因型HBV稳定复制表达细胞系,为研究我国流行HBV的生物特性和抗HBV新药筛选奠定了基础.
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聚合酶链反应
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文献信息
篇名 中国流行的C基因型HBV稳定复制表达细胞系的建立
来源期刊 解放军医学杂志 学科 医学
关键词 肝炎病毒,乙型 基因型 病毒复制 细胞系 抗原
年,卷(期) 2010,(12) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 1425-1428
页数 分类号 R512.62
字数 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 钟彦伟 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 18 141 7.0 11.0
2 刘妍 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 13 95 6.0 9.0
3 王琳 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 11 93 4.0 9.0
4 纪冬 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 7 27 2.0 5.0
5 刘文 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 3 10 1.0 3.0
6 思兰兰 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 1 1 1.0 1.0
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基因型
病毒复制
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期刊影响力
解放军医学杂志
月刊
0577-7402
11-1056/R
大16开
北京100036信箱188分箱
2-74
1964
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