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拟南芥AtCOR15a抗寒基因原核表达载体的构建及蛋白表达
拟南芥AtCOR15a抗寒基因原核表达载体的构建及蛋白表达
作者:
张桦
李建平
李晓荣
李静
王冬梅
郝晓燕
黄全生
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
AtCOR15a
原核表达载体
蛋白表达
摘要:
[目的]通过RT-PCR获得拟南芥AtCOR15a基因的ORF全长,经酶切、连接,以pET-28a(+)为原核表达载体.构建成pET28a-COR15a的重组表达载体,研究该基因在大肠杆菌中的表达情况,为进一步研究该基因的功能奠定基础.[方法]根据拟南芥AtCOR15a基因序列设计特异引物,利用RT-PCR的方法扩增目的基因,构建原核表达载体pET28a-COR15a,并将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,验证其蛋白表达量,并对其体系进行优化.[结果]AtCOR15a在大肠杆菌中成功表达,在37℃条件下诱导表达量最大,而30和16℃条件下蛋白表达量降低,IPTG浓度0.2~1.0 mmol/L对蛋白的表达量影响不大,并没有明显差异.但通过在不同诱导时间取样分析,结果发现加入IPTG后诱导5 h蛋白表达量最大,而8 h后逐渐降低.[结论]构建的原核表达载体在大肠杆菌中能高效表达,AtCOR15a融合蛋白分子量大约为19 kD,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
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文献信息
篇名
拟南芥AtCOR15a抗寒基因原核表达载体的构建及蛋白表达
来源期刊
新疆农业科学
学科
农学
关键词
AtCOR15a
原核表达载体
蛋白表达
年,卷(期)
2010,(10)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
2031-2036
页数
分类号
S188
字数
3310字
语种
中文
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AtCOR15a
原核表达载体
蛋白表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
新疆农业科学
主办单位:
新疆农业科学院
新疆农业大学
新疆农学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-4330
CN:
65-1097/S
开本:
大16开
出版地:
新疆乌鲁木齐市南昌路403号
邮发代号:
58-18
创刊时间:
1958
语种:
chi
出版文献量(篇)
6386
总下载数(次)
3
总被引数(次)
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