大肠杆菌β-半乳糖苷酶ED和EA的克隆、表达及活性测定

• 作者: 刘磊 孙牧男 方艳秋 许淑芬 谭岩 赵帅
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: β-半乳糖苷酶 酶受体 酶供体 免疫测定
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 40-44
• 页数: 5页
• 分类号: R696.3|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:制备大肠杆菌β-半乳糖苷酶(β-galactosidae)酶供体(ED)和酶受体(EA)片段,获得具有全酶活性的β-半乳糖苷酶.方法:以pSV-β-galactosidase control vector为模板设计引物,用PCR方法获得ED和EA片段DNA序列,插入克隆载体pGEM-T-easy中,获得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段分别插入原核表达载体pET20b~+,并转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导表达出ED、EA融合蛋白,以亲和层析纯化蛋白,通过ED与EA蛋白形成β-半乳糖苷酶、全酶活性试验来判断ED、EA的功能.结果:获得与pSV-β-galactosidase control vector一致的ED、EA碱基序列,构建了重组表达质粒pET20b-ED及pET20b-EA,并分别转化入大肠杆菌DE3,以IPTG诱导行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量为14 000及116 000处分别可见ED蛋白和EA蛋白条带,应用镍凝胶亲和层析纯化获得目的蛋白.结论:成功地制备了ED、EA蛋白,形成全酶活性的β-半乳糖苷酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘磊	吉林大学第一医院中心实验室	211	1231	18.0	25.0
2	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
3	方艳秋	吉林大学第一医院中心实验室	76	250	7.0	11.0
4	许淑芬	吉林大学第一医院中心实验室	37	200	6.0	13.0
5	孙牧男	吉林大学第一医院中心实验室	4	2	1.0	1.0
6	赵帅	吉林大学第一医院中心实验室	11	57	2.0	7.0