高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶

• 作者: 屠发志 崔艳艳 张添元 张爱联 易国辉 罗进贤
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤维素二糖水解酶 毕赤酵母 基因表达 纤维素酶活力
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1293-1297
• 分类号: Q556
• 字数: 2537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2010.08.010

摘要

用PER法扩增里氏木霉cbh Ⅱ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAPgK-cbhⅡ.通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种.在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L.其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性.