高密度发酵P.pastoris诱导表达egⅡ基因

• 作者: 尹慧祥 屠发志 张添元 张爱联 易国辉 罗进贤
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 工学
• 关键词: 里氏木霉 葡聚糖内切酶 基因表达 P.pastoris 高密度发酵
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 43-46
• 分类号: TQ92
• 字数: 2732字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2011.02.009

摘要

用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶II(egⅡ)基因.扩增基因经EcoR I和Not I双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ.通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌.工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50L的发酵罐中加入20L发酵液.连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h.放罐时生物量为A600=203,重组EGⅡ产量为90mg/L.表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性.