工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究

• 作者: 张泽华 张添元 张爱联 杨穗珊 沈锦城 罗进贤
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 漆酶 枯草芽孢杆菌 基因表达 P.pastoris 发酵 高密度发酵
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 字数: 2579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2013.01.007

摘要

用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2.构建表达质粒pPIC9K-lac2.通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2).在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白.在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基.在发酵的第一阶段连续24 h补加50％甘油-0.8％ PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8％ PTM4诱导49 h.在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20％ ～30％,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A600=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液.