用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因

• 作者: 屈直 屠发志 张添元 张爱联 易国辉 罗进贤
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤维素二糖水解酶 毕赤酵母 基因表达 酶活力
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 29-33
• 分类号: Q93
• 字数: 3441字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2010.04.006

摘要

用套叠PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P. pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbhⅡ.通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P. pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌.用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L.用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL.