pDC316-hIL-12-IRES-CKb双顺反子重组腺病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达

• 作者: 刘于保 刘强 李东风 李保朋 李子俊 梁长虹 秦玉璇 马艳红
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 双顺反子腺病毒载体 肌酸激酶 白细胞介素12 原代肝细胞
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 2180-2184
• 分类号: R318.04
• 字数: 5124字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2010.11.019

摘要

目的:构建含肌酸激酶(CK)基因和人白细胞介素12(hIL-12)基因的双顺反子重组腺病毒载体pDC316-hIL-12-IRES-CKb,并包装成重组腺病毒,检测其在肝细胞中蛋白表达和肝脏中磷酸肌酸的水平.方法:将PCR 扩增的产物CK片段和hIL-12片段顺次插入双顺反子腺病毒载体(IES)中,经同源重组、包装和扩增获得重组腺病毒子.再用该病毒感染体外培养的兔肝细胞,经Western blotting检测到 CK 蛋白的表达和ELISA检测培养液中hIL-12水平.结果:体外实验在感染肝细胞后检测到CK和hIL-12蛋白的表达;同时体内实验应用核磁共振波谱(MRS)的方法能检测到肝脏特异性CK产物磷酸肌酸的水平.结论:携带CK和hIL-12基因的双顺反子重组腺病毒能使CK 基因异源性地表达在肝脏并能用非侵袭性的MRS技术检测其表达.此载体的构建为进一步研究CK基因作为一个影像报告基因动态监测肝脏治疗基因hIL-12的表达奠定基础.