紫杉醇合成关键酶BAPT基因的克隆及原核表达

• 作者: 付春华 余龙江 刘博 张志建 张燏 张鹏 徐盼盼 郭佳玉
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 曼地亚红豆杉 紫杉醇 3-氨基-3-苯基丙酰转移酶基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（16）
• 页码范围: 3011-3014
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆曼地亚红豆杉紫杉醇生物合成途径中的关键酶3-氨基-3-苯基丙酰转移酶(3-amino-3-phenylpropanoyltrans-ferase,BAPT)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:首先提取曼地亚红豆杉细胞的总RNA,反转录获得其sscDNA,并以其为模板扩增BAPT酶的基因,然后将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组质粒pET32a(+)-BAPT,并将重组质粒转入E.coli BL21宿主中诱导表达.结果:扩增获得1338 bp的BAPT基因序列,成功构建了原核表达质粒pET32a(+)-BAPT,并在E.coli BL21中实现高效表达.结论:BAPT基因表达产物的分子量约为51 kDa,与预期大小一致.该研究为进一步分析曼地亚红豆杉BAPT酶的酶学特性奠定了基础.