蛋白激酶SGK2α在大肠杆菌中的表达纯化及抗体制备

• 作者: 吴琦 周启兵 孙晓杰 李珅 赵玫 郭红艳 黄常志
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: SGK2α 重组蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1765-1768
• 页数: 4页
• 分类号: Q71
• 字数: 3355字
• 语种: 中文

摘要

目的 该研究通过SGKα基因的克隆、原核蛋白表达以及纯化,制备抗SGK2α抗体,为进一步研究SGK2α蛋白的生物学功能奠定基础.方法 利用原核表达载体PGEX-4T-3构建重组质粒,并在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白:以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗SGK2α多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价,免疫印迹法检测抗体的特异性.结果 构建了PGEX-4T-3-SGK2α原核表达质粒,经原核表达和亲和层析获得GST-SGK2α融合蛋白,蛋白纯度在90%以上;利用GST-SGK2α融合蛋白制备多克隆抗体,抗体效价阳性且具有较强的特异性.结论 利用原核表达的GST-SGK2α融合蛋白成功地制备了抗SGK2α多克隆抗体,可用于免疫组织化学和免疫印迹检测以及功能研究.