沙丁胺醇直接竞争ELISA法快速测定

• 作者: 丁武 孙远明 庞杰 徐振林 杨金易 王保玲 袁利鹏 雷红涛
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 农学
• 关键词: 沙丁胺醇 酶标抗体 直接竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 页码范围: 270-274
• 分类号: S859.84
• 字数: 3882字
• 语种: 中文

摘要

建立沙丁胺醇的直接竞争ELISA(dcELISA)快速检测方法,采用高碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记沙丁胺醇单克隆抗体,棋盘滴定法确定包被抗原质量浓度和抗体稀释倍数,通过单因素试验,考察反应体系中表面活性剂、离子浓度、甲醇体积分数、pH值因素对dcELISA性能的影响,确定最优检测条件,同时考察方法的特异性.结果表明:酶标抗体克分子比为2.1时偶合物的滴度最高,最佳反应条件为包被抗原质量浓度1μg/mL,酶标抗体稀释2560倍,0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐抗体稀释液(PBS)中含体积分数0.05%的Tween-20、0.5mol/L NaCl溶液和体积分数5%的甲醇时dcELISA具有最高的灵敏度和最好的稳定性,所建立方法的IC50为10.3ng/mL,检测限为0.049ng/mL,线性范围0.3～76.30ng/mL,批内变异系数13.8%,批问变异系数为22.38%,与克伦特罗交叉反应率为321.18%,与溴布特罗交差反应率为29.09%,与其他结构类似物没有明显交叉反应.本研究所建立的dcELISA可用于沙丁胺醇和克伦特罗的多残留检测.