携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞的有效性

• 作者: 张金元 王巍巍
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 人脂肪源性干细胞 转染 增强绿色荧光蛋白 细胞活力
• 年，卷（期）: 2010,（36）
• 页码范围: 6695-6698
• 分类号: R394.2
• 字数: 4261字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.36.010

摘要

背景:细胞移植前,将目的基因转染干细胞可增强细胞治疗效果.但要实现目的基因的高效转移并适度表达,载体系统的选择是关键.目的:将携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞,检测病毒感染效率及感染后的细胞活力.方法:利用脂质体转染法获取慢病毒原液.设定不同感染复数(1,5,10,15,20),将带有增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞.荧光显微镜下观察病毒转染后人脂肪源性干细胞内增强绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪测定病毒感染效率.茜素红染色及油红O染色鉴定病毒转染后人脂肪源性干细胞的多向分化潜能.MTT法检测转染后人脂肪源性干细胞的增殖情况.结果与结论:随病毒感染时间及感染复数值的增加,人脂肪源性干细胞内绿色荧光表达明显增强,感染后第3天,感染复数为20时人脂肪源性干细胞内可见明显绿色荧光表达,病毒感染效率为60%:第5～7天,病毒感染效率可达90%～95%.转染后人脂肪源性干细胞经成骨及成脂诱导液培养后,茜素红染色及油红O染色阳性,表明病毒感染未影响人脂肪源性干细胞的多向分化能力.病毒感染后,人脂肪源性干细胞的增殖能力未受明显影响.说明携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体可以有效感染人脂肪源性干细胞.