正交优化设计蒙药阿给ISSR-PCR反应体系

• 作者: 冯金朝 刘越 孙洪波 孙辉 段福宇 毛珂 游光霞 王真 申刚义 蒋武霖 谢龙生 黄璐琦 黄雪涛
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 医学
• 关键词: 阿给 正交设计 ISSR-PCR 反应体系
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 7779-7781
• 分类号: R282.71
• 字数: 2745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.15.024

摘要

[目的]建立适用于蒙药阿给(Artemisia frigida Willd.)的ISSR反应体系,为ISSR标记技术在蒙药阿给遗传多样性研究中的应用奠定技术基础.[方法]利用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、Taq DNA聚合酶和引物浓度4因素3水平,对蒙药阿给ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对PCR的循环次数及退火温度进行试验.[结果]在20 μl反应体系中,Mg2+为1.5 mmol/L,dNTP为0.25 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.5 U,引物为0.75 μmol/L时,且ISSR最适的循环次数为40,最适退火温度为56.0 ℃,扩增效果最好.[结论]筛选出的反应体系适用于蒙药阿给的ISSR扩增.