基因Ⅶ型新城疫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 丁铲 于圣青 仇旭升 孟春春 张向乐 段云兵 詹媛 金仕强
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅶ型新城疫病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 8-14
• 分类号: S852.695.5
• 字数: 4760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2011.05.002

摘要

根据Ⅶ型新城疫病毒基质蛋白基因保守序列设计并合成特异性引物,建立快速检测Ⅶ型新城疫病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆Ⅶ型新城疫病毒M基因靶序列,并将其连入T-Easy载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999。检测结果显示,该方法的灵敏度可达100 copies/μL,而且特异性良好,除Ⅶ型新城疫病毒外,对Ⅱ型/Ⅲ型/IV型/Ⅸ型新城疫病毒、H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究所建立的检测方法重复性好,批内和批间变异系数均小于5%。对40份实验感染样品的检测结果表明,其检出率为95%,而常规RT-PCR方法检出率仅为70%,表明该方法比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高、特异性更强。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁铲	中国农业科学院上海兽医研究所	95	454	11.0	16.0
2	于圣青	中国农业科学院上海兽医研究所	53	286	9.0	14.0
3	张向乐	中国农业科学院上海兽医研究所	5	23	3.0	4.0
4	孟春春	中国农业科学院上海兽医研究所	21	62	5.0	6.0
5	仇旭升	中国农业科学院上海兽医研究所	36	114	7.0	8.0
6	詹媛	中国农业科学院上海兽医研究所	16	27	3.0	4.0
7	段云兵	南京农业大学动物医学院	3	14	2.0	3.0
8	金仕强	四川农业大学动物医学院	2	18	2.0	2.0