人胶质细胞源性神经营养因子基因片段克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 万全 刘亚珍 刘永茂 施雨露 王友联
• 来源期刊: 国际生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经生长因子类 基因表达 逆转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 1-4
• 分类号: R3
• 字数: 3146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2011.01.001

摘要

目的 在大肠杆菌中表达具有生物活性的人胶质细胞源性神经营养因子(glial cell linederived neurotrophic factor,GDNF)蛋白.方法 从人胶质瘤组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法扩增出GDNF DNA片段,并将经双酶切后的GDNF基因片段直接与表达载体pET28a+连接,构建重组表达载体pET28a+-GDNF,再将其转入大肠杆菌BL21中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达;采用分子筛层析法对表达产物进行纯化;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其纯度进行鉴定.结果 酶切和测序证实,PCR扩增出GDNF基因片段为GDNF成熟肽编码序列;表达产物的SDS-PAGE显示,相对分子质量16 000处有一新增蛋白带.结论 本研究所构建的原核表达系统可表达人GDNF.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘永茂	吉林大学白求恩医学院实验中心	32	158	8.0	11.0
2	施雨露	吉林大学白求恩医学院实验中心	22	70	5.0	7.0
3	王友联		13	49	4.0	6.0
4	刘亚珍	吉林大学第一医院药剂科	5	23	2.0	4.0