含五聚结构域的重组人β2m-GFP蛋白的构建

• 作者: 丁洁 王燕
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 人β2m 五聚体 原核表达 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: R711
• 语种: 中文

摘要

本研究的目的是为得到表达人MHCⅠ类分子轻链蛋白β2m、β2m的C-末端与一段五聚体(penta)序列相连、且共价结合一段荧光索编码序列(GFP)的五聚重组人β2m-GFP蛋白.采用PCR扩增GFP基因及β2m基因片段,将其克隆到原核表达载体,并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达融合蛋白.提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果表明,成功将GFP基因或人β2m基因片段插入含五聚结构域的PVT2载体.转化菌经诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,分子量与预期的大小基本一致.重组蛋白用Ni-NTA柱提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.Western blot显示重组蛋白具有良好的免疫活性.因此,我们获得了含五聚结构域的人β2m-GFP在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究含五聚结构域的重组MHCⅠ类分子的功能及应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁洁		9	0	0.0	0.0
2	王燕		9	0	0.0	0.0