组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞中表达

• 作者: 冷希岗 刘兰霞 宋丽萍 张海玲 朱敦皖 楼莎 董庭婷 董霞
• 来源期刊: 生物医学工程与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 组织因子途径抑制因子 绿色荧光蛋白 双顺反子表达载体 血管再狭窄
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 178-182,封2
• 分类号: Q78
• 字数: 3966字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 313细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体.方法:以含有全长DNA的plR ES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFPl-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFPl-Nuc-TFPI.将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达.结果:经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高.结论:成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达.