含绿色荧光蛋白和hytk双顺反子真核表达载体的构建及其在膀胱癌细胞中的表达*

• 作者: 冯凯 叶传忠 张芳林 李梁 林震 裴雪涛 陈仕平
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光 基因 核糖体 膀胱肿瘤
• 年，卷（期）: 2001,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 825-829
• 页数: 6页
• 分类号: Q753|R737.14
• 字数: 3716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2001.09.003

摘要

目的:构建一种带有绿色荧光蛋白(gfp)、潮霉素磷酸转移酶和HSV-tk的融合基因cDNA(hytk)的新型真核表达载体.方法:利用脑炎心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES),将gfp的cDNA与hytk基因连接,构建获得含gfp和hytk基因的重组质粒;lipofectin介导下转染人膀胱癌细胞株EJ,并检测其表达情况.结果:成功地构建了含gfp和hytk基因双顺反子真核表达载体,PCR检测证实转基因细胞的gfp与hytk基因的整合,荧光显微镜下可观察到发绿色荧光的转基因细胞,MTT法测定示丙氧鸟苷(GCV)对EF/hytk-gfo细胞有明显的杀伤作用,此杀伤效应呈时间和剂量依赖性,72 h IC50值为2.16 mg/L,而对野生型的EJ细胞无明显毒性(P＜0.05).结论:含绿色荧光蛋白和hytk基因双顺反子真核表达载体的构建为hytk基因治疗恶性肿瘤用于临床提供了新的治疗工具及随访检测手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴雪涛	军事医学科学院输血研究所	124	630	13.0	20.0
2	陈仕平	福建医科大学附属协和医院泌尿外科	58	171	8.0	9.0
3	叶传忠	福建医科大学附属协和医院泌尿外科	13	56	5.0	7.0
4	林震	福建医科大学附属协和医院泌尿外科	28	106	7.0	8.0
5	张芳林	福建医科大学附属协和医院内分泌科	3	32	2.0	3.0
6	李梁	军事医学科学院输血研究所	16	80	4.0	8.0
7	冯凯	军事医学科学院输血研究所	22	165	7.0	12.0