菌寄生真菌黄蓝状菌(Talaromyces flavus)几丁质酶基因的克隆与生物信息学分析

• 作者: 咸洪泉 李多川 李安娜 汤伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄蓝状菌 几丁质酶 基因克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1089-1098
• 分类号: S476
• 字数: 6834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.06.016

摘要

菌寄生真菌的几丁质酶有很强的降解几丁质能力,在控制植物病害方面起着重要的作用.为克隆和研究菌寄生真菌黄蓝状菌(Talaromyces flavus)几丁质酶基因(tfchi1),本研究根据真菌几丁质酶基因的保守序列设计扩增基因中间片段的简并引物,采用RT-PCR、3'-RACE及5+-TAIL的方法获得了该基因的DNA和mRNA序列(GenBank:GU361769,GU361770).tfchi1长为2 561 bp,具有6个内含子,长度分别为129、78、68、65、53和59 bp,包含1 194bp的ORF,编码一个由397个氨基酸组成的蛋白.推导的tfchi1氨基酸序列以及蛋白质结构生物信息学分析表明,该蛋白具有典型的几丁质酶催化区保守序列SXGGW和DGXDXDWE,属于糖苷水解酶18家族几丁质酶,与柄篮状菌(Talaromyces stipitatus ATCC 10500)几丁质酶(XP_002480365)氨基酸序列同源性为96％,分子量为43.47kD,等电点为4.97.该蛋白无信号肽序列,有15个潜在的N-糖基化位点,Tfchi1的二级结构以无规卷曲和α-螺旋为蛋白的主要结构元件,三级结构中有(α/β)8的圆桶形结构.tfchi1转化毕赤酵母(Pichia pastoris )GS 115,酵母工程菌可分泌具几丁质酶活性的表达产物,重组蛋白的分子量与理论值相符.结果说明,本研究已从T.flavus中正确克隆了1个糖苷水解酶18家族几丁质酶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	咸洪泉	山东农业大学植物保护学院	43	244	9.0	14.0
3	李多川	山东农业大学植物保护学院	73	827	17.0	23.0
4	李安娜	山东农业大学植物保护学院	9	73	4.0	8.0
5	汤伟	青岛农业大学生命科学学院	4	22	3.0	4.0