MHC-Ⅰ类链相关基因A真核表达载体的构建及稳定转染舌鳞癌细胞的实验研究

• 作者: 李超 李跃辉 杨丹 石芳琼 翦新春 蒋灿华 陈新群
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MHC-Ⅰ类链相关基因A Tca8113-Tb细胞系 质粒构建 基因转染
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 专栏论著
• 页码范围: 437-441
• 分类号: R739.86
• 字数: 4356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1182.2011.04.026

摘要

目的 构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系.方法 采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1,构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA,脂质体法转染Tca8113-Tb细胞,G418筛选,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系,RT-PCR、real time PCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达.结果 通过PCR技术获取TMICA基因并成功克隆入载体,测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同.转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达,RT-PCR、real time PCR及免疫细胞化学检测到目的 基因MICA在转染细胞中为过表达.结论 pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	翦新春	中南大学湘雅医院口腔颌面外科	213	1153	16.0	22.0
2	蒋灿华	中南大学湘雅医院口腔颌面外科	61	312	11.0	15.0
3	陈新群	中南大学湘雅医院口腔颌面外科	35	132	7.0	9.0
4	李超	中南大学湘雅医院口腔颌面外科	49	333	10.0	16.0
5	李跃辉	中南大学肿瘤研究所	35	119	7.0	9.0
6	杨丹	中南大学湘雅医院口腔颌面外科	9	12	2.0	3.0
7	石芳琼	中南大学湘雅医院口腔颌面外科	7	25	3.0	5.0