表达人冠状病毒NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒的制备与表达分析

• 作者: 周为民 张庭瑛 王惠娟 谭文杰 赵国霞 赵敏 邓瑶 陆柔剑 高基民
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人冠状病毒NL63 棘突蛋白 受体结合区,重组痘苗病毒 表达
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 250-256
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1|Q78
• 语种: 中文

摘要

HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入.本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合区小片段:RS)的重组痘苗病毒(vJSC1175-S1;vJSC1175-S2;vJSC1175-RL;vJSC1175-RS),酶切测序证实表达载体构建正确,免疫荧光分析(IFA)各重组痘苗病毒中棘突蛋白不同片段的表达与定位,western-Blot分析表明各种重组蛋白表达正确.分析结果显示:4种重组蛋白均能有效表达,S1、RL及RS蛋白的荧光主要分布在细胞膜上,而S2蛋白的荧光则主要分布于细胞浆,各个片段的分子量大小与文献报道相同,并可进行正确的翻译修饰(糖基化).本研究首次采用痘苗病毒天坛株载体构建制备了表达HCoV-NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒,为进一步分析人冠状病毒HCoVNL63棘突蛋白的结构功能及探索其抗原性和免疫原性奠定了基础.