hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达

• 作者: 朱戈 李丰 李晓东 郭冰玉
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: hFAK 蛋白质印迹 融合蛋白 免疫荧光 胃癌
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 584-586,591
• 分类号: Q257
• 字数: 2157字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20110705.1001.010

摘要

目的 构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位.方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转.以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4T-2表达载体中.原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌SGC -7901细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位.结果hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3 200 bp.原核诱导出GST-hFAK并进行纯化；Western blot检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130 kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位.结论成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达.