酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

• 作者: 周希珍 李晓峰 秦成峰 秦鄂德 赵慧 邓永强 高岚
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酵母双杂交 乙型脑炎病毒 NS5蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 382-384
• 分类号: R512.32
• 语种: 中文

摘要

目的 应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白.方法 构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白.结果 构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性.经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用.结论 经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础.