Sox2- R9- EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定

• 作者: 刘亚 孙雪萍 张运海 曹鸿国 殷慧群 章孝荣
• 来源期刊: 生物医学工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: SOX2基因 原核表达 细胞穿膜肽 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 143-149
• 分类号: R318.5
• 字数: 5358字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-6278.2011.03.003

摘要

构建、表达、纯化、鉴定Sox2- R9 - EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性.以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET- 28a- EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,Ni2+柱亲和层析纯化和SDS- PAGE检测表达产物后,将Sox2- R9 - EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞中以观察其转导活性.成功构建Sox2- R9 - EGFP融合蛋白原核表达载体,纯化后蛋白经SDS- PAGE检测证实融合蛋白片段大小正确,加到培养的猪胎儿成纤维细胞中可观察到Sox2-R9-EGFP融合蛋白能进入细胞,且部分可定位于细胞核.获得了Sox2- R9 - EGFP原核蛋白表达栽体,R9能介导Sox2蛋白进入细胞,为进一步利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS细胞)的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章孝荣	安徽农业大学动物科技学院	156	1145	16.0	25.0
2	张运海	安徽农业大学动物科技学院	61	264	9.0	14.0
3	刘亚	安徽农业大学动物科技学院	55	274	11.0	14.0
4	曹鸿国	安徽农业大学动物科技学院	27	42	3.0	6.0
5	孙雪萍	安徽农业大学动物科技学院	5	0	0.0	0.0
6	殷慧群		1	0	0.0	0.0