家蚕肠道产淀粉酶细菌的分离鉴定及其酶基因的克隆与表达

• 作者: 刘朝良 朱保建 杨文静 王在贵 邹昌瑞 魏国清
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕 肠道细菌 α-淀粉酶 16S rDNA 克隆及原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 219-229
• 分类号: Q786
• 字数: 8791字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2011.02.016

摘要

从家蚕(Bombyx mori L.)5龄幼虫肠道分离鉴定产淀粉酶细菌菌株以用作微生态制剂的研究,并对该菌α-淀粉酶基因进行克隆、序列分析及在大肠杆菌中原核表达.通过含淀粉NA培养基筛选分离得到产淀粉酶菌,通过形态学观察及16S rDNA序列分析鉴定其种属,DNS法测定酶活,并设计了淀粉酶基因引物进行克隆,构建了DZ-a号菌淀粉酶基因的原核表达载体,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中并诱导表达.共分离得到2株产淀粉酶细菌菌株,将其PCR扩增得到的165 rDNA序列分别与GenBank上已有序列进行比对,均与芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus有99%的同源性,DZ-a号菌和DZ-h号菌的产酶能力分别为20.5 U/mL和24.2 U/mL.产淀粉酶基因片段测序结果表明两株菌的克隆基因片段长度分别为3 414 bp和3 378 bp,均包括完整的编码区序列,可编码586个氨基酸,SDS-PAGE分析得到大小约66 kD的目的蛋白.鉴定该2株菌DZ-a、DZ-h号菌均属于芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌,克隆测序所得序列为完整的蜡样芽孢杆菌α-淀粉酶基因序列,并成功表达.为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定了试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝良	安徽农业大学生命科学学院	93	675	15.0	20.0
2	朱保建	安徽农业大学生命科学学院	38	191	7.0	12.0
3	王在贵	安徽农业大学生命科学学院	43	230	9.0	12.0
4	魏国清	安徽农业大学生命科学学院	28	205	9.0	13.0
5	杨文静	安徽农业大学生命科学学院	7	62	4.0	7.0
6	邹昌瑞	安徽农业大学生命科学学院	3	38	3.0	3.0