异淀粉酶产生菌的分离鉴定及异淀粉酶基因的克隆表达

• 作者: 赵淑琴
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 异淀粉酶 分离鉴定 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2018,（17）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 122-127
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2018.17.021

摘要

目的:为了进一步提高淀粉的利用率,从微生物中获得高产量异淀粉酶的菌株.方法:本实验从富含淀粉的土壤中筛选出1株高产异淀粉酶的菌株,命名为LZ-5,通过菌落形态观察、生理生化特性实验、16S rDNA序列及gyrB基因分析,构建系统发育进化树并对其进行鉴定;根据NCBI上的迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)异淀粉酶基因设计引物,扩增出异淀粉酶基因后,以pMD-18T为载体,构建重组质粒,导入到E.coli DH5a感受态细胞,挑选阳性重组质粒进行酶切鉴定及表达产物的检测.结果:LZ-5鉴定为枯草芽孢杆菌,所产异淀粉酶酶活力为10.9 U/mL;测序结果与NCBI上报道的异淀粉酶基因相似度达到96％,表明将枯草芽孢杆菌的异淀粉酶基因成功转化到大肠杆菌中.经IPTG诱导表达,构建的大肠杆菌工程菌,通过细胞破碎仪破碎后,测得异淀粉酶酶活力为28.4 U/mL,是菌株LZ-5的2.6倍.结论:细菌异淀粉酶基因重组表达是解决异淀粉酶活力低的主要策略之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵淑琴	甘肃农业大学基础实验教学中心	27	74	5.0	8.0