蜡梅AFLP反应体系优化及引物筛选

• 作者: 冯志敏 胡湛 范国强 赵振利 赵明晓
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蜡梅 AFLP 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 园艺科学
• 页码范围: 523-529
• 分类号: S685.99
• 字数: 4892字
• 语种: 中文

摘要

通过对影响AFLP反应体系主要因素的优化,建立了蜡梅的AFLP反应体系,并筛选出了适宜该体系分析的引物.结果表明,20 μL蜡梅AFLP最佳酶切体系为模板600 ng DNA,3 U Pst Ⅰ和3 UMse Ⅰ,在37℃下双酶切2h;在20 μL最佳连接体系中酶切产物为15 μL,3 U T4连接酶,0.25 μmol·L-1 Pst Ⅰ接头,2.5 μmol·L-1 MseⅠ接头,1 μL 10×T4 Buffer,在22℃下连接10 h；在20 μL最佳预扩反应体系中稀释10倍的连接产5 μL,2.0mmol·L-1 Mg2+,2 U Taq酶,300 μmol·L-1 dNTP,0.5μmol·L-1 Pst Ⅰ和Mse Ⅰ引物(P+AGA/M+ ATC)；在20 μL最佳选择性扩增反应体系中5 μL稀释20倍的预扩增产物,2.0 mmol· L-1的Mg2,2UTaq酶,300μmol·L-1dNTP,0.5 μmol·L-1 Pst Ⅰ和Mse Ⅰ引物(P+ AGA/M+ ATC).最后,利用上面的体系筛选出了96对适宜于蜡梅AFLP分析的引物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范国强		106	1402	22.0	31.0
2	赵振利		59	389	11.0	17.0
3	冯志敏		11	47	5.0	6.0
4	胡湛		3	85	2.0	3.0
5	赵明晓		2	4	1.0	2.0