悬铃木AFLP反应体系优化及引物筛选

• 作者: 刘荣宁 范国强 谢一鸣 赵改丽
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 三球悬铃木 AFLP 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 林业科学
• 页码范围: 402-406,410
• 分类号: S792.37
• 字数: 3808字
• 语种: 中文

摘要

以三球悬铃木为试验材料,通过对影响AFLP反应体系的各主要因素的研究,建立了悬铃木AFLP分析技术的体系.结果表明,悬铃木AFLP最佳酶切体系(20 μL)为模板DNA 1 000 ng,PstⅠ和MseⅠ各为3U,在37℃下双酶切3h;在20 μL最佳连接体系中,15 μL酶切产物为3U,T4连接酶,0.25 μmol·L-1Pst I接头,2.5μmol·L-1 MseⅠ接头,1 μL 10×T4 buffer,在22℃下连接12 h；在20 μL最佳预扩反应体系中稀释15倍的连接产物5 μL,2.0 mmol·L-1 Mg2+,2 UTaq酶,200 μmol·L-1 dNTP,0.5μmol·L-1 PstⅠ和Mse Ⅰ引物(P+AGA/M+ ATC)；在20 μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释15倍的预扩增产物,2.0 mmol·L-1的Mg2+,2U Taq酶,200 μmol·L-1 dNTP,0.5μmol·L-1 Pst I和MseI引物(P+AGA/M+ ATC).最后,利用上面的体系筛选出了92对适宜于悬铃木AFLP分析的引物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范国强	河南农业大学泡桐研究所	106	1402	22.0	31.0