嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶基因(KerF)的克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 宋爱荣 尤升波 岳寿松 朱友峰 游银伟 邹晓凤 黄亦钧
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 嗜麦芽窄食单胞菌 角蛋白酶 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 363-368
• 分类号: S941.42
• 字数: 4346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.024

摘要

为研究嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)降解羽毛的机理,本研究克隆了嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶基因(KerF),并获得其全长基因序列1981 bp,含有1个1743 bp的开放阅读框,编码580个氨基酸(GeneBank登陆号HM590650),将角蛋白酶KerF基因连入表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28-KerF并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),获得重组工程菌.采用金属Ni+螯和层析柱对所表达的角蛋白酶进行纯化,获得分子量为50 kD的重组角蛋白酶KerF.该酶的最适温度为50℃,最适pH值为9.0.金属离子Mn2+、Co2+、Mg2+、Ni+、Ba2+、Zn2+、Ca2+、Fe3+及蛋白酶抑制剂二苯基甲基磺酰氟(PFSM)能强烈抑制该酶活性,乙胺四乙酸(EDTA)对该酶活具有促进作用.本研究结果表明,嗜麦芽窄单胞菌角蛋白酶基因在大肠杆菌中获得成功表达,重组角蛋白酶KerF为碱性丝氨酸蛋白酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋爱荣	青岛农业大学生命科学学院	18	104	6.0	9.0
2	岳寿松	青岛农业大学生命科学学院	38	336	9.0	16.0
4	尤升波	山东省农业科学院高新技术研究中心	22	149	7.0	11.0
5	游银伟	山东省农业科学院高新技术研究中心	24	134	8.0	10.0
6	黄亦钧	山东省农业科学院高新技术研究中心	3	24	3.0	3.0
7	朱友峰	山东省农业科学院高新技术研究中心	5	23	3.0	4.0
8	邹晓凤	青岛农业大学生命科学学院	2	13	2.0	2.0