VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达

• 作者: 刘成硅 张凯伦 张晓明 王刚 蒋雄刚
• 来源期刊: 华中科技大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 人血管内皮细胞生长因子165 人组织型纤溶酶原激活因子 真核表达载体 体外表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 55-59
• 分类号: R34
• 字数: 4493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2011.01.013

摘要

目的 构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况.方法 将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达.结果 成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P＜0.01).结论 成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张晓明	广州军区武汉总医院心胸外科	97	305	9.0	13.0
2	张凯伦	华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科	123	382	9.0	11.0
3	蒋雄刚	华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科	49	120	6.0	7.0
4	王刚	华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科	46	312	9.0	16.0
5	刘成硅	华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科	19	70	5.0	7.0