重组GST-HBx蛋白在表达过程中断裂状况的研究

• 作者: 张文露 杜茜 汤华 胡接力 胡源 蔡雪飞 黄爱龙 龚旭阳
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HBx蛋白 原核表达 GST蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 377-381
• 分类号: R373.2
• 字数: 3834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.05.001

摘要

目的 在对乙型肝炎病毒非结构蛋白HBx研究的过程中,发现体外表达HBx蛋白产物的稳定性存在差异.为了了解其中的原因,拟通过原核表达方式进行分析.方法 以包含全长HBV DNA的质粒pEco63为模板,通过PCR反应,扩增HBV X基因全长序列(1～154氨基酸)和截短序列(48～104氨基酸,48～146氨基酸,98～146氨基酸),将这几种不同长度和位置的HBX DNA序列克隆到pGEX4T-2原核表达载体中,并通过下游引物设计中引入6×组氨酸标签序列.结果 最终成功构建N端融合GST蛋白标签序列和C端融合6×组氨酸标签序列的4种HBx重组表达载体.将4种包含不同长度HBx的重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta,培养至菌液浓度A值大约0.6左右,加入终浓度0.1 mmol/L的IPTG进行诱导表达.提取全菌蛋白通过Western印迹对HBx各重组蛋白产物的N端和C端进行检测.结论 在分段表达的HBx重组蛋白中发生了多处局部的断裂,而断裂部位主要集中于GST蛋白上.而造成这一结果的原因可能与HBx蛋白功能区域暴露后与GST相互作用有关.