大口黑鲈溃疡综合征病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 张莉莉 李胜杰 白俊杰 邓国成 马冬梅
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大口黑鲈溃疡综合征病毒 TaqMan-MGB探针 定量PCR 病毒检测
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学与兽医学
• 页码范围: 99-102
• 分类号: S94
• 字数: 3139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-411X.2011.02.023

摘要

根据大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV)的甲基转移酶(MTase)基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针,优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,建立了LBUSV的TaqManMGB探针荧光定量PCR检测方法.用含有MTase基因的质粒pDNA-MT系列稀释作为标准品模板,在荧光定量PCR仪上进行PCR反应,绘制标准曲线,斜率为-3.24,R2=0.999,呈现很好的线性关系,扩增效率1.04.灵敏度检测结果表明,PCR反应24个循环时町以检测到的质粒最小浓度是102拷贝数/μL.选用107、106、105、104拷贝数/μL 4个浓度梯度质粒做模板,变异系数在1.1%～3.4%范围内,说明该方法具有良好的重复性和稳定性.利用该方法可以准确地检测出感染LBUSV的病鱼,特异性强.