应用E1区缺陷载体构建携带SEA基因的选择性腺病毒

• 作者: 胡建鹏 董秉正 郝林 陈猛 韩从辉
• 来源期刊: 江苏大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 肿瘤 金黄色葡萄球菌肠毒素A
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 245-248
• 分类号: R373
• 字数: 2747字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2011.03.015

摘要

目的:构建由端粒酶启动子(hTERT)调控的携带超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcus aureus enterotoxin A,SEA)基因的选择性复制重组腺病毒.方法:应用酶切、连接方法将hTERT连接于腺病毒穿梭质粒E1A和E1B序列之前调控E1A和E1B蛋白的表达,CMV启动子和SV40分别调控目的基因SEA的表达和终止,利用脂质体将腺病毒骨架质粒和穿梭质粒共同转染人胚肾293细胞(HEK-293)进行同源重组,获取选择性复制腺病毒CMV-SV40-hTERT(CSS-H),氯化铯梯度离心纯化重组腺病毒,并测定病毒滴度.结果:应用PCR验证、双酶切分析、序列测定等方法验证重组质粒基因片段连接正确无突变,通过同源重组获得携带超抗原SEA基因片段的CSS-H重组腺病毒,测定滴度为2.9×1010 pfu/ml.结论:携带SEA基因选择性复制重组腺病毒CSS-H成功构建.