真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究

• 作者: 李红钢 梅小琴 熊承良
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CatSper1基因 RNA干扰 共转染
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 501-506
• 分类号: Q78
• 字数: 3795字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2011.06.016

摘要

目的 构建pEGFP-N1-CatSper1重组质粒,在真核细胞中表达CatSper1,利用化学合成siRNA抑制小鼠CatSper1基因的表达,并筛选抑制效果最佳的siRNA序列. 方法 利用重组PCR克隆小鼠CatSper1全长cDNA,构建到真核表达载体中.生物信息分析软件校正结果,获得三条针对雄性小鼠CatSper1的siRNA序列,合成后分别与重组质粒pEGFP-N1-CatSper1共转染到小鼠成神经瘤N2a细胞株中,通过观察EGFP荧光强度、实时定量聚合酶链反应和WesternBlot等方法,分析干扰效果,筛选能显著降低N2a细胞中外源性CatSper1表达量的siRNA序列. 结果 成功克隆小鼠CatSper1基因的全长cDNA片段(2,061 bp),并构建到pEGFP-N1表达载体中.三个siRNA干扰组的CatSper1 mRNA和蛋白表达与空白对照组相比均下降,其中以靠近3'端的siRNA干扰作用更为明显,阴性对照siRNA组未引起CatSper1 mRNA和CatSper1蛋白表达明显变化. 结论 在小鼠神经瘤N2a细胞株中成功表达外源性CatSper1蛋白,并筛选出有效的siRNA,为深入研究CatSper1功能及用于避孕提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊承良	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	134	943	15.0	22.0
3	李红钢	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	26	129	5.0	10.0
5	梅小琴	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	2	1	1.0	1.0