大鼠SLC7a8基因的克隆及真核表达载体的构建

• 作者: 周希 戴晓春 方俊旭 杨德业 林素 王本极 黄晓燕
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 真核表达载体 SLC7a8 肾小管上皮细胞 基因 大鼠 克隆
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 515-519
• 分类号: R544.1|Q78
• 字数: 4230字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2138.2011.06.002

摘要

目的:克隆大鼠左旋氨基酸转运体(SLC7a8)基因cDNA的读码框(CDS),构建携带SLC7a8基因的重组真核表达载体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)中的功能作准备.方法:从非高血压大鼠(wistar -kyoto,WKY)肾脏组织提取总RNA,通过RT-PCR得到总cDNA,PCR法扩增,产物连接pGEM -T Easy载体测序分析正确后,再以PCR方法扩增,将其连接入真核表达质粒pcDNA3.1(+).以PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将重组载体pcDNA3.1(+) -SLC7a8用脂质体包裹转染大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),RT -PCR法及Western blotting法分别检测转染后SLC7a8 mRNA及蛋白表达水平.结果:成功克隆了大鼠SLC7a8基因cDNA,重组真核表达载体pcDNA3.1(+) -SLC7a8构建成功,且证实转染后肾小管上皮细胞的SLC7a8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05).结论:成功克隆了SLC7a8基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1(+) -SLC7a8,能够在NRK-52E细胞中获得有效过表达,这为进一步探讨SLC7a8基因的生物学功能奠定了基础.