重组结核分枝杆菌PPE17蛋白原核可溶性表达纯化和血清学诊断研究

• 作者: 孙卫国 张灵霞 李国利 李邦印 熊志红 王倩 程小星
• 来源期刊: 中国预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 PPE17蛋白 可溶性表达 血清学诊断
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 910-913
• 页数: 4页
• 分类号: R183
• 语种: 中文

摘要

目的 利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌PPE17蛋白并进行纯化,研究其免疫学特性,并评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值.方法 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中利用PCR扩增PPE17核酸序列然后克隆至融合表达载体pET-DsbC中,转入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,用Western Blot和EL ISA方法进行抗原性初步评价.结果 融合蛋白Ds-bC-PPE17在原核系统内经IPTG诱导表达后,主要以可溶性形式表达存在,经镍柱层析获得了纯的重组蛋白,纯度达95％以上.Western Blot和EL ISA方法结果证明重组DsbC-PPE17蛋白具有较强的抗原活性.用纯化的PPE17蛋白做抗原,临床诊断结核病人血清,阳性率达60％.结论 融合蛋白DsbC-PPE17在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病的血清学诊断抗原.