植物甜蛋白Mabinlin Ⅱ在大肠杆菌中的表达

• 作者: 李雪玲 王昌博 罗文华 胡文锋 陈永泉 颜少帆 黄东彦
• 来源期刊: 现代食品科技
• 学科: 生物学
• 关键词: 甜味蛋白 马槟榔 MabinlinⅡ 大肠杆菌 诱导表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 384-389
• 分类号: Q78
• 字数: 3954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-9078.2011.04.004

摘要

本研究从马槟榔种子中扩增得到天然植物甜蛋白MabinlinⅡ的全长cDNA序列(M1),并通过特异引物PCR去除部分5'端序列得到修饰型的基因序列(M2).将M1与M2分别克隆至表达载体pET43.1a(+),并分别转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)和Rosetta(DE3),成功构建出BL21(DE3)/pET43.1a-M1(缩写B-M1)、BL21(DE3)/pET43.1a-M2 (缩写B-M2)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M1(缩写R-M1)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M2(缩写R-M2)四个表达系统.经IPTG诱导表达后证明,R-M1的重组甜蛋白表达量最高,并可检测到轻微甜味和后甜感.同时利用镍柱对R-M1诱导表达的目的蛋白进行纯化,得到单一条带的重组甜蛋白.