人TANK结合激酶1的基因克隆、表达及生物活性鉴定

• 作者: 宋婷 岳翔 张艳红 管楷 袁媛 郑子瑞 钟辉 魏从文
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人TANK结合激酶1 真核表达 萤光素酶报告基因实验
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 667-670
• 分类号: Q78
• 字数: 2190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.015

摘要

目的:克隆人TANK结合激酶l(TBK1)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性.方法:应用RT-PCR方法,以HeLa细胞RNA为模板,扩增获得TBK1基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中,以LipofectAMINE2000转染试剂转染pcDNA-Flag-TBK1至293细胞中进行瞬时表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况.结果:测序结果表明,从人HeLa细胞总RNA中克隆到正确的TBK1基因全长编码序列,利用Western印迹检测其在293细胞中获得有效表达,利用萤光素酶报告基因实验检测TBK1可以诱导IFN-β转录激活.结论:真核表达的人TBK1具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础.