基于Overlap PCR方法进行猪伪狂犬病毒TK基因缺失载体的构建、鉴定及生物学分析

• 作者: 吕素芳 毕研丽 沈志强 郭广君 魏凤
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 TK基因 Overlap PCR 转移载体
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 40-43
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 3960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2011.02.022

摘要

构建伪狂犬病毒TK基因缺失载体,在BHK-21细胞中表达,为研究TK基因生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据.根据伪狂犬病病毒sA株TK基因序列,设计引物,通过Overlap PCR扩增到长约1814bp的TK基因,与PMDl8-T载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pMD-TK与表达载体pBluescript SK(+)分别用限制性内切酶BamH I,HindIII酶切后,定向亚克隆;重组表达质粒pBTK经PCR、酶切鉴定后,阳性质粒进行测序.利用脂质体介导阳性重组质粒pBTK转染BHK.21细胞,通过噬斑纯化获得获得重组病毒PRV/TK-.该重组病毒在体外传15代后仍具有良好的遗传稳定性,应用PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞基因组中扩增到TK基因,其TCID50毒价是5.75.本实验为PRV基因功能的研究及PRV基因缺失苗的研究提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭广君		26	107	6.0	9.0
3	沈志强		525	1950	18.0	25.0
5	吕素芳		35	137	6.0	10.0
8	魏凤		82	262	8.0	12.0
12	毕研丽		5	18	3.0	4.0