GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位

• 作者: 伍贤军 李晓萌 王妍青 程秀 缪璇 辻一郎
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: GFP-SUMO-3融合蛋白 重组蛋白质类 LNCaP细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1024-1027
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位.方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体.重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布.结果:重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3经BamHⅠ和Xho Ⅰ双酶切鉴定,得到大小分别为4 700和312 bp的条带,与预期结果一致.测序结果显示,GFP在N端,是阅读框正确的SUMO-3的基因序列.在LNCaP细胞中过表达GFP-SUMO-3融合蛋白,Western blotting得到相对分子质量为39 000的蛋白表达条带,与GFP-SUMO-3大小相符.荧光显微镜观察,转染重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3的细胞中呈绿色荧光,主要在细胞核内表达,与DAPI重合.结论:成功构建重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3,并表达代绿色荧光蛋白的SUMO-3融合蛋白,鉴定出SUMO-3在LNCaP细胞中的核定位性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓萌	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	11	21	3.0	4.0
2	缪璇	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	2	0	0.0	0.0
3	伍贤军	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	2	0	0.0	0.0
4	程秀	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	1	0	0.0	0.0
5	王妍青	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	1	0	0.0	0.0