类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达

• 作者: 伍贤军 刘金美 李晓萌 杨南扬 缪璇 迁一郎
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 类泛素化蛋白3 GST融合蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1010-1014
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建pGEX-4T- 1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白.方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312 bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒.将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST- SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白.结果:通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312 bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致；在终浓度为0.1 mmol· L-1的IPTG诱导时,GST- SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化.结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓萌	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	11	21	3.0	4.0
2	杨南扬	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	3	2	1.0	1.0
3	缪璇	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	2	0	0.0	0.0
4	伍贤军	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	2	0	0.0	0.0
5	刘金美	东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所	1	0	0.0	0.0