人卵泡抑素基因真核表达载体构建和体外表达

• 作者: 华荣 张海英 梁方方 檀大羡 牛向丽 莫毅 谢丹尼 陈自洪
• 来源期刊: 中国计划生育学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵泡抑素 真核表达载体 基因转染 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 210-212,220
• 分类号: R34
• 字数: 2365字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8189.2011.4

摘要

目的:体外构建携带人卵泡抑素基因(FS)cDNA的真核表达载体,并观察其在幼年叙利亚地鼠肾细胞(BHK21)中的表达.方法:从新鲜人卵泡抽提液细胞中提取RNA,应用RT-PCR方法扩增人FS cDNA序列,克隆到pMD-18T载体中,构成pMD-FS重组克隆质粒.经测序鉴定后,双酶切得到人FS基因cDNA序列,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-FS重组表达质粒.pECFP-FS重组表达质粒经酶切和PCR鉴定,通过脂质体2000介导瞬时转染BHK21细胞,并检测绿色荧光蛋白(GFP)的荧光表达.结果:成功构建pMD-FS重组克隆质粒,FS cDNA序列测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_013409.1)同源性为100%;成功构建pEGFP-FS重组表达质粒,将其转染BHK21细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:本实验成功构建了人FS的pMD-FS重组克隆质粒和pEGFP-FS重组表达质粒,为进一步研究FS对哺乳动物卵泡发育的影响奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	檀大羡		38	146	6.0	10.0
2	莫毅		46	261	9.0	14.0
3	梁方方		10	32	4.0	5.0
4	牛向丽		13	33	3.0	5.0
5	陈自洪		14	39	3.0	5.0
6	华荣		8	16	1.0	4.0
7	张海英		19	95	4.0	9.0