PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 乔爱君 常永生 方福德
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: PNPLA3 过表达 干扰 腺病毒
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 485-489
• 分类号: Q291
• 字数: 3084字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定.方法 根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆人穿梭载体pAdTraek-CMV的Bgl Ⅱ和Xho I位点,干扰序列克隆人pAdTrack-U6穿梭载体,Pme I酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化E.coli BJ5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用Pac I酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率.结果 测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPL43基因过表达及干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.5×10<'11>VP/mL.以120感染复数感染小鼠肝脏原代细胞,感染效率可达到90%以上,干扰效率超过80%以上.结论 成功构建了PNPLA3基因的过表达以及干扰腺病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方福德		13	69	4.0	8.0
2	常永生		6	27	3.0	5.0
3	乔爱君		1	0	0.0	0.0