细粒棘球绦虫AgB8/1重组抗原表达系统的构建

• 作者: 古力帕丽·麦曼提依明 吾拉木·马木提 陈洁 陈璐 马海梅
• 来源期刊: 新疆医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 AgB8/1重组抗原 原核表达质粒
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 246-250
• 分类号: R383.3
• 字数: 4243字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-5551.2011.03.004

摘要

目的 构建pET32a-AgB8/1原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达.方法 从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板用基因特异性引物扩增EgAgB8/1基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此基因片段为依据,人工合成合成EgAgB8/1抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性.通过对pUCm-T/AgB8/1重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确性后,转化至E.coli BL21 (DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1重组蛋白.用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平.结果 测序表明,AgB8/1抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒.SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组蛋白得到成功表达,在相对分子量约28 kDa处有表达条带.结论 本研究成功构建了pET32a-AgB8/1原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础.