H3N2SIV河南分离株NS1基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘兴友 姚四新 王三虎 贾贝贝 赵坤 赵朴 郑玉姝
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒A型 病毒非结构蛋白质类 克隆,分子 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 665-667
• 分类号: R382.5|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆并原核表达猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)基因,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定基础.方法 从H3N2 SIV河南分离株中提取病毒RNA,RT-PCR扩增NS1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDSPAGE和Western blot进行鉴定.结果 测序结果表明,扩增的NSI基因与国内外多株SIV NSI基因序列同源性达98%以上,表达的重组蛋白相对分子质量约为27 000,能与SIV感染猪阳性血清发生特异性反应.结论 已成功克隆了H3N2 SIV河南分离株NSI基因,并在E.coli BL21(DE3)中表达了重组NS1蛋白,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定了基础.