Elafin真核表达载体的构建及其对气道粘液高分泌的调节

• 作者: 余红梅 周向东 尤列·皮尔曼 李琪 维克多·科罗索夫
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Elafin 粘蛋白 脂多糖 核转录因子-κB
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 440-445
• 分类号: R363
• 字数: 5436字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.05.014

摘要

目的:构建天然内生多肽Elafin真核表达载体,探讨其对气道粘液高分泌的影响.方法:抽提Elafin行RT-PCR获取Elafin cDNA,双酶切后将片段装载到pMD18-T载体上.以pMD18-T-Elafin为模板行PCR反应,产物胶回收并双酶切后定向克隆至pEGFP-N1上,转化,筛选,双酶切鉴定重组质粒.将pEGFP-N1-Elafin转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,Western blot检测细胞内Elafin蛋白的相对含量,RT-PCR检测各组Elafin mRNA和粘蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平,荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NF-κB)的活性;ELISA法分析各组细胞MUC5AC蛋白的相对含量.结果:成功构建Elafin真核表达载体,转染重组Elafin的HBE16细胞成功表达Elafin蛋白.LPS刺激可增强NF-κB 的活性,该活性在转染重组Elafin后显著降低;MUC5AC蛋白含量及mRNA水平在LPS刺激后也显著升高,在转染重组Elafin后二者的表达水平明显降低.结论:Elafin真核表达载体成功构建,初步发现Elafin可通过降低NF-κB 的活性来下调MUC5AC的表达,为进一步深入研究其对气道粘液高分泌的调节机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周向东	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	235	1426	17.0	27.0
2	李琪	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	34	222	7.0	13.0
3	余红梅	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	14	36	4.0	5.0